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动物实验外包——裸鼠成瘤模型

作者:admin 浏览量:7 来源:本站 时间:2026-04-20 08:25:42

信息摘要:

裸鼠肿瘤模型是比较常见和常用的一种肿瘤动物模型,它在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠肿瘤模型的接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式,接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。造模方法:1、细胞是贴壁细


裸鼠肿瘤模型是比较常见和常用的一种肿瘤动物模型,它在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠肿瘤模型的接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式,接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。


造模方法:


1、细胞是贴壁细胞,细胞培养在 RPMI-1640 培养基中,含 10%胎牛血清,100U/mL 的青霉素,100ug/mL 的链霉素,培养在 37℃含 5%CO2的细胞培养箱中。细胞传代培养:当细胞长至 80-90%时,去除培养基,加入 PBS 洗 1-2 次,去除 PBS后,加入 1ml 胰酶消化 1-3min 后,加入 3ml 完全培养基中和胰酶终止消化,将消化的细胞转移至 15ml 离心管中,1000rpm 离心 5min。倒掉上清后,加入 3ml 培养基重悬细胞,1:3 传代至培养皿中培养。


2、将长到培养皿 80%-90%的细胞用胰酶消化下来,1000rpm 离心,去除上清,加入完全培养基重悬细胞,将细胞分别种在 6 孔板中,每孔种 1×105个细胞。


3、待细胞贴壁后,按照 MOI=1:10 的比例加入慢病毒感染细胞,感染 24h 后,去除含病毒的培养基,加入完全培养基。培养 48h 后,加入 puromycin 进行筛选。


4、将细胞进行扩增培养。待细胞长到指定数量时,将细胞用胰酶消化下来,1000rpm离心后,去除上清,加入 PBS 将细胞洗一遍,再次加入 PBS 重悬,对细胞进行计数,将数量调整为 2×107个细胞/ml。 


5、8周龄15只裸鼠适应性饲养7天后,随机分为3组,每组分别在右腋皮下接种2×106(100ul/只)细胞(细胞分为对照组细胞即未处理的细胞,NC 组细胞即感染 NC 病毒的细胞,shRNA 细胞即感染 sh-RNA 病毒的细胞)。接种约两周后出现肿瘤结节,每周用游标卡尺测量肿瘤大小两次。将裸鼠放入鼠笼中正常饲养 4 周后处死裸鼠,取裸鼠肿瘤拍照冻存。


哪些细胞能够成瘤?


目前验证过的细胞有HCT116,HePG2,A549,MKN45,AGS, CT26 ,NCI-H460,HT-29,SK-OV-3,MCF-7,B16,SGC7901,BEL-7402,BGC-823 ,PC-12等


存在问题:为什么肿瘤不长?


如果细胞接种后超过预期的观察时间仍未成瘤,需要从一下方面进行排查原因:一是细胞活力,细胞活力是影响肿瘤形成的重要原因,活力不够不能成瘤,因此细胞消化下来PBS清洗后要尽快接种;二是动物选择,选择的裸鼠周龄不宜过大,否则也会增大成瘤难度(如果还未成瘤建议更换缺陷程度更高的Nod-scid小鼠,NOG小鼠);三是饲养环境,环境影响动物状态,状态差的鼠容易发生死亡,不易成瘤。


为什么瘤子长起来又消失?


很可能开始我们观察到的肿瘤是炎症反应,到后来肿瘤细胞被小鼠自身吸收,需要继续观察肿瘤细胞吸收之后是否还能长出来,长不出来建议分析上述原因重新实验。


需要观察什么?


在肿瘤长出后,需要密切观察动物的状态,体重和瘤体积。瘤体积的测量一般采用公式V=ab2/2进行计算。动物体重的增加活着减少量,直接反应着动物的整体状态。


如何判断肿瘤是否出现了转移?


第一:病理剖检。如果肿瘤出现了转移,在肝脏或者肾脏等组织上肉眼可见明显转移灶。

 

第二:小动物活体成像。如果接种的肿瘤细胞带有荧光标签或者荧光素酶,可以借助小动物活体成像仪进行观察瘤细胞的大小和转移情况。


第三:小动物核磁。小动物核磁技术可以更明细那地观察到肿瘤细胞在肝脏,肺脏或者其他器官的转移情况。 


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